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          服務項目

          實驗動物技術服務

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          基因敲除動物定制服務

          上傳日期:2017-11-14  閱讀次數:6565



          基因敲除動物定制服務

          概述

          基因敲除和基因嵌入技術是上個世紀90年代出現的最新外源DNA導入技術;蚯贸腔虼虬屑夹g的一種,類似于基因的同源重組。指外源DNA與受體細胞基因組中序列相同或相近的基因發生同源重組,從而代替受體細胞基因組中的相同/相似的基因序列,整合入受體細胞的基因組中。此法可產生精確的基因突變,也可正確糾正機體的基因突變;蚯度胗址Q基因置換,它是利用內源基因序列兩側或外面的斷裂點,用同源序列的目的基因整個置換內源基因。

           

          服務項目:

          AlphaKnockout基因打靶專家系統、TurboKnockout基因敲除小鼠、CRISPR-Pro基因敲除/敲入鼠、TALEN基因敲除/敲入鼠、轉基因小鼠、GFP轉基因鼠

           

          服務內容:

          1.基因載體的構建:把目的基因和與細胞內靶基因特異片段同源的DNA 分子都重組到帶有標記基因(如neo 基因,TK 基因等)的載體上,成為重組載體;蚯贸菫榱耸鼓骋换蚴テ渖砉δ,所以一般設計為替換型載體。

          2.ES細胞的獲得:現在基因敲除一般采用是胚胎干細胞,最常用的是鼠,而兔,豬,雞等的胚胎干細胞也有使用。常用的鼠的種系是129及其雜合體,因為這類小鼠具有自發突變形成畸胎瘤和畸胎肉瘤的傾向,是基因敲除的理想實驗動物。而其他遺傳背景的胚胎干細胞系也逐漸被發展應用。

          3.同源重組:將重組載體通過一定的方式(電穿孔法或顯微注射)導入同源的胚胎干細胞(ES cell)中,使外源DNA 與胚胎干細胞基因組中相應部分發生同源重組,將重組載體中的DNA 序列整合到內源基因組中,從而得以表達。一般地,顯微注射命中率較高,但技術難度較大,電穿孔命中率比顯微注射低,但便于使用。

          4.選擇篩選已擊中的細胞:由于基因轉移的同源重組自然發生率極低,動物的重組概率為10-2 ~10-5 ,植物的概率為10-4 ~10-5 。因此如何從眾多細胞中篩出真正發生了同源重組的胚胎干細胞非常重要。目前常用的方法是正負篩選法(PNS法),標記基因的特異位點表達法以及PCR 法。其中應用最多的是PNS法。

          5.表型研究:通過觀察嵌和體小鼠的生物學形狀的變化進而了解目的基因變化前后對小鼠的生物學形狀的改變,達到研究目的基因的目的。

          6.得到純合體:由于同源重組常常發生在一對染色體上中一條染色體中,所以如果要得到穩定遺傳的純合體基因敲除模型,需要進行至少兩代遺傳。

           

          客戶提供:基因信息

           

          我們提交:轉基因動物

           

          服務周期:3個月(視服務內容而定)

           

          服務收費:根據實驗方案確定,請咨詢



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